AASLD中国之声丨丁建强教授：证实干细胞移植治疗α-1抗胰蛋白酶缺乏症的可行性

—— 作者: 时间:2021-01-28 11:08:27 阅读数: 29

α-1抗胰蛋白酶缺乏症是一种常染色体共显性遗传性肝病，晚期常常表现为肝肺功能衰竭，但供体器官严重缺乏，干细胞移植是一种潜在的治疗选择，但是干细胞肝向分化的肝细胞样细胞存在着分化不完全、成熟度低、肝细胞功能不完善和增殖能力可疑等问题。

2020年肝病研究学会（AASLD）年会上，我国学者、南方医科大学顺德医院感染病科丁建强教授团队的一篇口头报告证实了干细胞移植用于α-1抗胰蛋白酶缺乏症的可行性（摘要编号：33）。《国际肝病》特邀丁教授对该项研究做详细介绍，内容整理如下。

研究目的：α-1抗胰蛋白酶缺乏症是一种常染色体共显性遗传性肝病，晚期常常表现为肝肺功能衰竭，但供体器官严重缺乏，干细胞移植是一种潜在的治疗选择，但是干细胞肝向分化的肝细胞样细胞存在着分化不完全、成熟度低、肝细胞功能不完善和增殖能力可疑等问题。在本研究中，我们将人诱导多能干细胞（induced pluripotent stem cell，iPSC）进行肝定向分化，将尚未完全分化成熟的干细胞（hepatic-specified stem cell）经脾注射方法移植到α-1抗胰蛋白酶缺乏症转基因小鼠的肝脏内，1、3和6个月后肝活检进行干细胞定植与增生情况的研究。

材料和方法：转基因动物由人肝细胞表达α-1抗胰蛋白酶基因的固有启动子和“Z”突变cDNA质粒使用常规显微注射方法自行制备完成。人iPS干细胞DYR0100购自美国ATCC，使用mTeSRTM1干细胞培养液，在matrigel包被的6孔板上进行干细胞的培养，在长满前加Activin A (100 ng/ml)到RPMI+B27培养液20%O2培养5天，然后改为RPMI+B27加BMP-4 (20 ng/ml)和FGF-2 (10 ng/m

l)在4%O2培养5天，最后用StemPro Accutase收集细胞用于移植。移植前1周，FK506溶于饮用水中，给予成年鼠1μg/克体重/天。100万干细胞经脾注射移植到肝脏，1、3和6个月后活检肝脏，使用HSA和AAT抗体进行免疫荧光染色。用竞争性ELISA试剂盒检测小鼠人血清HSA含量。抗体OCT3/4、SOX17、FOXA2、AFP、ALB、SSEA4（R&D SYSTEMS）和GATA-4、HNF-4α、ASGPR1、CK-18、CK-19（Santa Cruz）用于干细胞的免疫荧光染色。抗人AAT抗体sc-3012（Santa Cruz）。

图2.转基因小鼠的建立

注：D/PAS染色的转基因小鼠肝脏组织（A）和B6对照（B）。经0.8%琼脂糖凝胶电泳的转基因PCR（C）和RT-PCR（D）产物，泳道1：转基因小鼠DNA，泳道2：B6小鼠DNA，泳道3：水对照。基因测序结果（E）。比例尺：50μm。

图3.hiPSC衍生肝特异性细胞在转基因小鼠肝脏中的再生

注：使用HSA免疫荧光染色和hAAT抗体共染色，评估移植细胞在转基因小鼠肝脏中的增殖。比例尺：100μm。显微镜放大20倍。

图4.小鼠血液中的HSA含量（n=6）

注：所有值均以平均值+ SEM得出给出。

图5.肝组织中HSA基因含量的百分比（n=6）

注：所有值均以平均值+ SEM得出给出。
结论：肝定向分化iPS干细胞成功地在α-1 抗胰蛋白酶缺乏症转基因小鼠肝脏内定植与分化增生，提示干细胞移植的方法是一个可行的治疗方法。

标签：快讯主题演讲甲肝

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